尊龙凯时提供的NCI-H1975人肺腺癌细胞培养指南以确保科学研究的顺利进行。以下是有关细胞培养的详细说明。
一、细胞培养条件
细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞
细胞生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基+10% FBS
传代方法：首次建议1:2传代
传代情况：2天更换培养液
备注：请使用无菌离心管收集瓶内培养基，留作过渡培养。
二、细胞收到后的处理
在细胞达到良好状态后，灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，请使用75%的酒精消毒整个细胞瓶，并在超净台内严格遵循无菌操作。然后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的细胞图像（建议每个倍数拍摄一张），前三天的照片将作为重要售后依据。若未提供照片，则默认细胞状态良好。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代
如果未达到80%的融合度，请将瓶内的完全培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；如细胞密度超出80%，可进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS缓冲液洗涤细胞1-2次。
- 加入约1-2ml的025%胰蛋白酶消化液至培养瓶，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，并观察细胞变化。当细胞大部分变圆并开始脱落时，迅速将其取出，轻敲培养瓶，随后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基以重悬细胞。
- 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补入新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。
b、细胞冻存
- 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
- 加入约1ml的025%胰蛋白酶消化液，并在显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基以终止消化。轻轻吹打，使细胞脱落，并将悬液转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清液，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃的冰箱。如果需要将细胞转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上后再进行转移。
c、细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管（请注意佩戴防护面具），迅速将其放入37℃水浴解冻，直至冻存管中没有冰晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清液，重新用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
- 次日，更换为新鲜的完全培养基以继续培养。
四、注意事项
特殊细胞如贴壁不牢，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。请将培养瓶内所有培养液收集至离心管，离心1000 RPM 5分钟，收集上清液以作过渡培养（后期进行对比培养）。沉淀的细胞加入胰酶1-2ml，轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止反应。再次离心，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。最后，按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中进行培养。
五、售后条款
尊龙凯时对细胞出现问题的处理方法如下：
- 什么情况下支持重发？
- 细胞在运输途中遇到问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等，均可重发。
- 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发。
- 常温发货细胞静置24小时后，干冰冻存发货细胞复苏后24小时内，若大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
- 若干冰冻存发货细胞复苏后24小时未开封并且出现污染，亦可重发。
- 如细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，采用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发。
- 收到细胞当天及后续2-3天内请拍照，如未告知则视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供前3天照片及操作详细步骤，通过技术人员确认后重发。
- 什么情况下不予重发？
- 因客户造成的细胞污染，不予重发。
- 客户不正确操作导致细胞状态不佳，不予重发。
- 使用非推荐细胞培养体系导致细胞状态不佳，不予重发。
- 细胞状态不佳而未提供培养前3天照片的，不予重发。
- 细胞培养受其他因素处理的不予重发。
- 在收到后2天内未告知问题，不予重发。
- 以具体情况为准。
使用尊龙凯时的NCI-H1975人肺腺癌细胞培养指南，确保您在实验过程中获得最佳结果。
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