本试剂盒专门设计用于科学研究目的,不得用于医学诊断。人可溶性E选择素(sE-selectin)Elisa试剂盒的使用说明书如下:
检测原理
本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。首先,将样本与预先包被的adropin(AD)抗体的微孔结合,依次添加标准品及HRP标记的检测抗体。经过适当温育后,彻底洗涤微孔。随后,使用底物TMB进行显色,TMB在过氧化物酶的催化下呈现蓝色,并在酸性环境中转变为最终的黄色。显色的深浅与样品中的adropin(AD)浓度呈正相关。最终,通过酶标仪在450nm波长下测量吸光度(OD值),以计算样本浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,确保操作过程中避免任何细胞刺激。采集血液后,进行3000转/分钟离心10分钟,以迅速分离血清与红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。进行3000转/分钟离心30分钟,收集上清。
3. 细胞上清液:进行3000转/分钟离心10分钟,以去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量生理盐水混合,通过捣碎获得匀浆。然后进行3000转/分钟离心10分钟,收集上清。
5. 保存:如果样本收集后未能及时检测,请按一次用量分装,保存在-20℃的环境中,避免反复冻融。样本在室温下解冻时,请确保均匀充分。
自备物品及操作注意事项
请遵循以下建议以确保试剂盒的最佳性能:
本试剂盒中标准品的浓度依次为:0、25、50、100、200、400pg/mL。
试剂的准备:20×洗涤缓冲液需按照1:20稀释,即将1份的20×洗涤缓冲液与19份蒸馏水混合。
洗板方法
按照标准操作流程进行洗板,以确保试剂盒的可靠性和准确性。
结果判断
为了绘制标准曲线,在Excel中将标准品浓度设为横坐标,OD值设为纵坐标,生成标准品线性回归曲线,并根据曲线方程计算各样本的浓度值。
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