尊龙凯时提供的人套细胞淋巴瘤细胞REC1培养说明书详细阐述了细胞培养的重要步骤与注意事项，为科研人员提供了全面的参考。

一、细胞培养条件

细胞名称：人套细胞淋巴瘤细胞REC1

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基+10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代

备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如果对比效果不理想，建议直接采购尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应尽快培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。

首先，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内严格操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。

在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后证明。如未提供照片，则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管，留5ml培养基放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度已超80%，即可进行以下传代步骤：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟。观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，然后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补充1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，置于显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，再转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴解冻，直至无结晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，再用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

注意，有些细胞在运输过程中可能会因粘附不牢而脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬并消化1-2分钟，最后用5ml完全培养基终止反应，重复离心和重悬步骤。各步骤过程中，务必注意保持无菌操作，确保细胞的健康发展。

五、售后条款

尊龙凯时为您提供完善的售后服务。若细胞出现问题，以下情况可申请重发：

1. 运输过程中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损等。
2. 48小时内报告的细胞污染问题，且提供真实实验结果。
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰发货细胞复苏24小时后若发现大部分细胞未存活，需提供真实细胞状态照片。
4. 细胞在开封后出现污染，需提供证据。
5. 在7天内提供细胞活性问题的验证结果，使用台盼蓝染色法鉴定。
6. 收到细胞后需在指定时间内拍照，未告知视为产品合格。

**不予以重发的情况包括客户造成的细胞污染、不正确操作导致细胞状态不佳等，这些均需根据具体情况判断。**