尊龙凯时推出的pCR-BluntII-TOPO-ZNF541(human)质粒，是一款经过严谨设计的生物科研产品，现提供05ug的质粒干粉规格。收到产品后，请根据产品管壁标签确认其形式，并在扩增前仔细查阅该质粒菌株的抗性、感受态及培养温度信息。

pCR-BluntII-TOPO-ZNF541(human)质粒扩增流程

在进行质粒扩增时，请遵循以下步骤：

1. 质粒干粉

该质粒在常温下运输，保存于-20℃，保质期为90天。请务必进行转化挑单克隆培养，切勿直接使用或进行测序。

1. 收到质粒干粉后，先在5000rpm离心1分钟，然后加入20μl的去离子水（ddH2O）以溶解质粒。
2. 取1支100μl感受态细胞，在冰上解冻10分钟，加入2μl质粒，随后冰浴30分钟，进行42℃热激60秒，随后再冰浴2分钟。
3. 在超净工作台中，加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养37℃，时间为45分钟。
4. 进行6000rpm离心5分钟，仅保留100μl上清液进行细菌重悬，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上。
5. 平板正向培养1小时后，再倒置在37℃条件下培养14小时。如需30℃培养，则需延长至20小时。
6. 挑取单菌落至LB液体培养基中，添加相应的抗生素，220rpm震荡培养14小时，随后按需提取质粒。

2. 甘油菌种

甘油菌种采用冰袋运输，保存于-80℃，保质期为90天，请务必划线挑单克隆培养。通过四区划线后挑取单菌落进行培养，酵母菌需先进行液体复苏。

3. 穿刺菌种

穿刺菌种以冰袋运输，保存于4℃，保质期为7天，需进行穿刺接种，液体培养后划线挑取单菌落。

4. 菌落平板

来自菌落平板的样品同样以冰袋运输，保存于4℃，保质期为7天。可直接挑取单菌落至液体培养基中。

5. 液体质粒

液体质粒以冰袋运输，保存于-20℃，保质期为90天，收到后可直接使用。

6. 滤纸质粒

滤纸质粒常温运输，保存于-20℃，也有90天的保质期。收到后，将滤纸圈剪下放入EP管中，加100μl无菌水浸湿，浸泡5分钟，然后吸取5μl进行质粒转化，最后全涂。

pCR-BluntII-TOPO-ZNF541(human)质粒提取步骤

本步骤为示例，无实际进行该产品的提取步骤。采用碱裂解法提取质粒是通过共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA的拓扑差异，实现有效分离。在特定pH值条件下，质粒DNA保持完整且易于复性。

提取操作步骤

1. 准备20ml已灭菌的培养管，并编号，分别加入8ml LB培养基和8µl相应抗生素。
2. 用10µl白色枪头挑取单个菌落至培养管中，恰品在37℃震荡过夜（274rpm）。
3. 取2ml的过夜培养液入离心管，室温下10000rpm离心2分钟，去除上清液。
4. 向沉淀中加入250µl Buffer P1（含RNase A），充分混匀。
5. 加入250µl Buffer P2，温和混匀4至6次以获得澄清液。
6. 再加入350µl Buffer N3，温和混匀， centrifuge 10000rpm 15分钟，滤掉沉淀。
7. 转移上清液至洁净的吸附柱中，离心1分钟，去除废液。
8. 加入150µl Buffer PB，离心1分钟，去液体。
9. 加入400µl Buffer PW，离心1分钟，倒掉废液，并进行空离心2分钟。
10. 将吸附柱放入新离心管中，开盖后风干。
11. 加90µl Buffer EB于吸附膜中，静置2分钟，离心1分钟。
12. 重组液体，再离心1分钟，标记并保存于-40℃。

注意事项

使用前，将试剂盒中的RNA酶添加至Buffer P1中，并于4℃保存。如需提升质粒提取效率，可将Buffer EB在65~70℃进行加热。

欲了解更多关于质粒载体的信息，欢迎咨询尊龙凯时！